一文看懂酶聯(lián)免疫分析試劑盒的基本原理及操作流程
更新時間:2022-06-16 點擊次數(shù):793
酶聯(lián)免疫分析試劑盒基本原理是利用抗原抗體反應的特異性,通過將待測物與酶連接,然后酶與底物產(chǎn)生顏色反應,其所生成的顏色深淺與待測抗原(或抗體)的含量成正比。這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。由于ELISA是基于抗原抗體反應的特異性,這意味著該種方法的測定對象既可為抗原也可為抗體:當被分析樣本為抗原時,檢測試劑可針對該種抗原產(chǎn)生特異性的抗體;當被分析樣本為抗體時,則其目標抗原可用作結(jié)合的試劑。
酶聯(lián)免疫分析試劑盒具體的操作流程:
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。