簡要描述:牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測牛生長激素基因的試劑盒
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 純度 | 詳詢 |
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貨號 | YLK10312P | 規(guī)格 | 50T |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | 科研實驗 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 英文名稱 | Bovine?growth?hormone?(BGH)Probe?qPCR?Kit |
運輸方式 | 低溫運輸 | 保存條件 | -20℃保存 |
有效期 | 12個月 | 自備試劑 | 樣品DNA |
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 | 牛生長激素基因染料法熒光定量PCR試劑盒 |
產(chǎn)品簡介
通用名稱:牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒
Name:Bovine growth hormone (BGH)Probe qPCR Kit
包裝規(guī)格:50T/盒
產(chǎn)品及特點
牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測牛生長激素基因的試劑盒,它具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)牛生長激素基因DNA高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7.本產(chǎn)品只能用于科研。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。
自備試劑
樣品DNA
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品待提取,最好設(shè)置N+2個提取,多出的是PC(樣品制備陽性對照)和NC(樣品制備陰性對照)。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA/提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):
成分/每管 | 樣品管 N+2個 | PCR陰性對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(1-6管) |
A | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
D | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
N+2個待測DNA模板 | 7 μL | - | - |
C | - | 7 μL | - |
第6步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(1-6號) | - | - | 7 μL(1號樣到1號管,2號樣到2號管…) |
11.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
PCR反應(yīng) (45個循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 60 sec(采集FAM通道的熒光信號) |
四、數(shù)據(jù)處理
12.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品核酸濃度的log值,再推算出其濃度。
13.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于39。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于39則為陽性。如果在39-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
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